路易斯维尔大学的重点学科包括商科、工程、教育、社会学、医学与健康等。优势专业包括工业工程、听力学、生物科学、化学、护理学、临床心理学、公共事务、社会工作、政治学、社会学等。

在所有的研究所当中，路易斯维尔大学的医疗科学中心有着特别重要的地位，中心不仅为路城提供很重要的医疗服务，也兼办针对疾病的根源的研究。这些医学研究取得了一些很有价值的成果，包括其所参与的子宫颈癌疫苗的发明项目，世界第一例完全独立的人工心脏移植手术、世界第一例手移植手术和巴氏涂片检查的发明。医疗学院也开创了第一辆平民救护车，美国第一个急诊室，以及一个美国首批的血库。该校的健康科学中心（Health Science Center）位于路易斯维尔市市中心内的医院区，内有大学医学相关学院科系以及大学附设医院。

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